Die DNA-Polymerase β umfasst eine aminoterminale 8-kDa-Domäne und eine carboxyterminale 31-kDa-Domäne. Die N-terminale ssDNA-Bindungsdomäne hat eine Desoxyribose-Phosphodiesterase-Aktivität, während die C-terminale Domäne eine Nukleotidyltransferase-Aktivität hat. Die Säugetier-DNA-Polymerase β, eine DNA-Reparaturpolymerase, wird in kultivierten Zellen konstitutiv exprimiert, aber die Behandlung von Zellen mit DNA-alkylierenden Mitteln wie N-Methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin (MNNG) oder Methylmethansulfonat erhöht den beta-pol-Spiegel. Die DNA-Polymerase β füllt einzelne Nukleotidlücken in der DNA, die durch den Basen-Exzisions-Reparaturweg von Säugetierzellen entstehen.